Topmusicanswers
Juster glødetemperaturene, ettersom høye konsentrasjoner av PCR-tilsetningsstoffer eller ko-løsningsmidler svekker primerbinding til målet. Øk mengden DNA -polymerase, eller bruk DNA -polymeraser med høy prosessivitet.
...
- Sekvensfeil ved terminering av PCR -produkter.
- Falsk positiv forsterkning.
- Ressurser.
- Hva er den vanlige feilsøkingen som kan oppstå i PCR?
- Hvorfor fungerer ikke PCR -en min?
- Hva forårsaker PCR -flekker?
- Hva skjer hvis glødetemperaturen er for høy?
Hva er den vanlige feilsøkingen som kan oppstå i PCR?
Feilsøkingsguide for PCR
| Problem | Årsaker |
|---|---|
| Lav eller ingen PCR -produktutbytte | Thermocycler -programglødning og forlengelsestemperaturer er ikke optimale |
| Reaksjon mangler Taq -polymerase eller annen reaksjonskomponent | |
| Grunnkonsentrasjonen er for lav | |
| Målsekvensen er ikke i DNA -malen |
Hvorfor fungerer ikke PCR -en min?
Hvis du glemmer bare en komponent i PCR -reaksjonen, enten det er DNA -polymerase, primere eller til og med mal -DNA, vil det resultere i en mislykket reaksjon. Den enkleste løsningen er å gjenta reaksjonen. ... Hvis det fortsatt ikke er noe PCR -produkt etter dette, er det sannsynlig at det er noe annet som hindrer reaksjonen din.
Hva forårsaker PCR -flekker?
DNA -forurensning, RNA i DNA -prøve, høy konsentrasjon av DNA i PCR -reaksjonen kan forårsake flekker. ... DNA -smøring vanligvis forårsaket i planter på grunn av høy konsentrasjon av mal -DNA.
Hva skjer hvis glødetemperaturen er for høy?
Glødetemperaturen var for høy
Hvis glødetemperaturen er for høy, klarer ikke primere å binde seg til malen. Tommelfingerregelen er å bruke en glødetemperatur som er 5 ° C lavere enn Tm av primeren.
