For mye mal i pcr

Mengden totalt DNA i en PCR har en markert effekt på utfallet av en PCR -prosedyre. Bruk av for mye totalt DNA resulterer i pakket DNA i reaksjonsbeholderens lukkede rom og kan føre til falsk priming og til og med dårlig DNA -syntese på grunn av hindret spredning av store Taq -polymerasemolekyler.

1. Hvor mye mal skal jeg legge til i PCR?
2. Kan for mye primer hemme PCR?
3. Hva kan forårsake at en PCR -reaksjon mislykkes?
4. Hvor mye DNA er nok for PCR?

Hvor mye mal skal jeg legge til i PCR?

Selv om det i teorien er ett molekyl i malen som vil være tilstrekkelig, brukes vanligvis større mengder DNA for en klassisk PCR, for eksempel opptil 1 ug genomisk pattedyr -DNA og så lite som 1 pg plasmid -DNA (1).

Kan for mye primer hemme PCR?

Forurensninger i dNTP -blandingen kan føre til ufullstendig eller feil amplifikasjon eller PCR -inhibering. Bruk dNTP-er av høy kvalitet. Bruk av overdreven konsentrasjon av primere kan øke sjansen for at primere bindes uspesifikt til uønskede steder på malen eller til hverandre.

Hva kan forårsake at en PCR -reaksjon mislykkes?

Hvis du glemmer bare en komponent i PCR -reaksjonen, enten det er DNA -polymerase, primere eller til og med mal -DNA, vil det resultere i en mislykket reaksjon. Den enkleste løsningen er å gjenta reaksjonen. ... Hvis det fortsatt ikke er noe PCR -produkt etter dette, er det sannsynlig at det er noe annet som hindrer reaksjonen din.

Hvor mye DNA er nok for PCR?

I en typisk 50 µL reaksjon er 1-2 enheter DNA -polymerase tilstrekkelig for amplifikasjon av mål -DNA. Imidlertid kan det være nødvendig å justere enzymmengdene med vanskelige maler. For eksempel, når hemmere er tilstede i DNA -prøven, kan økning av mengden av DNA -polymerase forbedre PCR -utbyttet.